中国科学院、武漢ウイルス研究所 Zhengli-Li Shi [ 石 正麗 (せき せいれい、シー・ジェンリー)］教授 & 米国ノースキャロライナ大学Ralph S. Baric教授の共同研究論文の和訳だよ。
【Google翻訳 & Sobokuによる和訳修正】
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循環するコウモリのコロナウイルスのSARS様クラスターはヒトへ感染する可能性を示す
原著論文タイトル：A SARS-like cluster of circulating bat coronaviruses shows potential for human emergence
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Main（本文）続き - ❸
SHC014-MA15の感染に対する既存のワクチンの有効性を評価するために、高齢マウスに二重不活化全SARS-CoV（DIV = Double-Inactivated whole SARS-CoV）を接種しました。以前の研究は、DIVは相同ウイルスによる攻撃から若いマウスを中和し、保護することができることを示した14。しかし、ワクチンは免疫病理の増強も観察された高齢動物を保護できず、ワクチン接種により動物が害を受ける可能性を示しています15。ここで、体重減少またはウイルス力価に関して、DIVはSHC014-MA15でのチャレンジ（誘発）からの保護を提供しないことがわかった（補足図5a、b）。他の異種グループ2b CoVの以前の報告と一致15、DIVワクチン接種された老齢マウスの血清もSHC014-MA15を中和できなかった（補足図5c）。特に、DIVワクチン接種は、確実な免疫病理学（補足表4）および好酸球増加症（補足図5d–f）をもたらしました。総合すると、これらの結果は、DIVワクチンがSHC014の感染に対して保護的ではなく、高齢のワクチン接種グループの疾患を増大させる可能性があることを確認しています。
マウスへのDIVワクチン接種とは対照的に、SHC014-MA15を弱毒生ワクチンとして使用すると、SARS-CoVによる攻撃に対して潜在的な交差防御が示されましたが、結果には重要な注意事項があります。若いマウスに104 pfuのSHC014-MA15 を感染させ、28日間観察しました。次に、29日目にSARS-MA15でマウスにチャレンジ（誘発）しました（補足図6a）。高用量のSHC014-MA15によるマウスの以前の感染は、致死量のSARS-MA15による攻撃に対する防御をもたらしましたが、SHC014-MA15感染の28日後に誘発された抗血清からの最小のSARS-CoV中和反応のみがありました（補足図6b、1：200）。二次抗原ブーストの非存在下で、感染後28日とは、抗体価の予想ピークを表しており、時間をかけてSARS-CoVの防御が低下することを意味する16、17。致死量のSARS-CoVでの攻撃に対する保護を示す同様の結果が、体重減少およびウイルス複製に関して加齢BALB / cマウスで観察された（補足図6c、d）。しかし、104 pfu のSHC014-MA15感染量は、一部の高齢動物で10％を超える体重減少と致死性を誘発しました（図1および補足図3）。低用量のSHC014-MA15（100 pfu）でのワクチン接種は体重減少を誘発しなかったが、高齢動物をSARS-MA15致死量チャレンジ（誘発）から保護することもできなかったことを発見しました（補足図6e、f）。合わせて、データはSHC014-MA15チャレンジが保存されたエピトープを介してSARS-CoVに対する交差保護を与える可能性があることを示唆していますが、必要な用量は病因を誘発し、弱毒ワクチンとしての使用を排除します。
SHC014スパイクにはヒト細胞の感染を媒介し、マウスに疾患を引き起こす能力があることを立証したので、次にSARS-CoVに使用されるアプローチに基づいて、完全長のSHC014-CoV感染性クローンを合成しました（図3a）2。Vero細胞での複製により、SARS-CoVの場合と比較してSHC014-CoVの欠損がないことが明らかになりました（図3b）。ただし、SHC014-CoVは、感染後24時間と48時間の両方でHAE初代培養で有意に（P <0.01）減衰しました（図3c）。マウスのin vivo（生体内）感染は、有意な体重減少を示さなかったが、SARS-CoV Urbaniと比較して、完全な長さのSHC014-CoV感染の肺におけるウイルス複製の減少を示した（図3d、e）。一緒に、結果は、完全な長さのSHC014-CoVの生存率を確立しますが、その複製がヒト呼吸器細胞およびマウスでの流行SARS-CoVの複製と同等であるためにはさらなる適応が必要であることを示唆します。
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| 図3：完全長のSHC014-CoVはヒトの気道で複製されますが、流行性のSARS-CoVの毒性はありません。（6つの連続するcDNA（指定SHC014A、SHC014B、SHC014C、SHC014D、SHC014E及びSHC014F）は、完全長cDNAを発現アセンブリ向けに許可する固有のBglI部位に隣接するように合成したSHC014-CoVの分子クローンの）概略オープンリーディングフレーム（1a、1b、スパイク、3、エンベロープ、マトリックス、6-8およびヌクレオカプシド用）。下線付きのヌクレオチドは、制限酵素切断後に形成されたオーバーハング配列を表します。（b、c）Vero細胞（b）または高分化した一次気液界面HAE細胞培養（c）の感染後のSARS-CoV Urbani（黒）またはSHC014-CoV（緑）のウイルス複製）MOI 0.01で。サンプルは、各グループの生物学的複製（n = 3）を使用して個々の時点で収集されました。データは、VeroおよびHAEセルの両方に対する1つの実験を表しています。（d、e）体重減少（n = 3 SARS-CoV MA15の場合、n = 7 SHC014-CoVの場合、n = 6 SARS-Urbaniの場合）（d）および肺におけるウイルス複製（n = 3のSARS-Urbaniの場合およびSHC014-CoV）（e）1×10 5 pfuのSARS-CoV MA15（灰色）、SHC014-CoV（緑色）またはSARS-CoV Urbani（黒色）に感染した10週齢のBALB / cマウスルート内。各データポイントはグループの平均を表し、エラーバーはsem **を定義します個々の時点の両側スチューデントt検定を使用したP <0.01および*** P <0.001 。 |
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| 補足図5：二重不活化全SARS-CoVワクチンは、高齢動物をキメラSARS様ウイルス感染から保護することができません。 12ヵ月齢のマウスにワクチン接種し、DIV（点線、n = 4）またはPBS（実線、n = 3）で追加免疫し、ブーストの21日後に104 PFUのi.nを介してSHC014-MA15を感染させました i.n. ルート。 （a）SHC014-MA15チャレンジ後の体重減少、および（b）感染後４日の肺でのウイルス複製。 （c）SHC014-MA15（緑色、n = 3）の、高齢のDIVワクチン接種マウスの血清による中和。 （d–h）DIVおよび模擬ワクチン接種マウスのH＆Eについて染色された病理組織学的肺切片。 （d）DIVまたは模擬ワクチン接種感染後４日後の好酸球スコア（スケール0〜4）。 （e、f）（e）模擬ワクチン接種SHC014-MA15および（f）DIV SHC014-MA15感染マウスの代表的なH＆E肺切片。白い三角形は、個々の好酸球の位置を示しています。各図について、SEMによって定義されたグループ平均とエラーバーを表す中心値。個々の時点の両側スチューデントのT検定に基づくp値。* * 0.05のようにマークされます。 |
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| 補足表4、ワクチン接種後の組織学的スコアリングおよびSARS様キメラウイルスによるチャレンジ。 |
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| 補足図6：キメラSARSに似たウイルスは、致命的なSARS-CoVチャレンジ（誘発）に対する不完全な保護を提供します。 （a）1 × 104 PFUのSHC014-MA15（緑）または模擬感染したPBS（黒）をワクチン接種した10週齢のマウスに1 × 105 SARS-CoV MA15を投与し、日中コース（ワクチン接種SHC014-MA15の場合n = 4、ワクチン接種PBSの場合n = 5）。 B）SHC014-MA15をワクチン接種した10週齢マウスのSARS-CoVの血清中和（n = 3）。 （c、d）1 ×104 PFUのSHC014-MA15ワクチン接種（緑色）またはモックワクチン接種のPBS（黒）12か月齢のマウスに1×105 PFU SARS-CoV MA15を接種し、（c）について評価した体重減少および（d）ウイルス複製（ワクチン接種したSHC014-MA15の場合n = 4、ワクチン接種したPBSの場合n = 5）。 （e、f）1 × 102 PFUのSHC014-MA15ワクチン接種（緑）またはモックワクチン接種のPBS（黒）12か月齢マウスに1 × 105 PFU SARS-CoV MA15を投与し、（ e）体重減少（ワクチン接種SHC014-MA15でn = 4、PBSワクチン接種でn = 5）および（f）ウイルス複製（ワクチン接種SHC014-MA15でn = 3、PBSワクチン接種でn = 2）。各図について、SEMによって定義されたグループ平均とエラーバーを表す中心値。 |
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