2020年2月26日水曜日

英国保健省「コロナウイルスは50万人の英国人を殺し、英国人口の80%に感染する可能性がある」

2020年2月26日、英国保健省は、「英国民の80%が新型ウイルスに感染し、50万人が死ぬ」と予測した。

裏社会の親分のイギリスが感染目標を設定した。たくさん人が死んでもらいたいらしい。

英文ニュースを和訳しておくよ。
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コロナウイルスは50万人の英国人を殺し、英国人口の80%に感染する可能性があると政府の文書は示している

「合理的な最悪のケース」シナリオに関する大臣への公務員の説明会は、潜在的な制御されない英国の発生の規模を明らかにする


リークされた政府の文書は、病気が国の80%まで感染することができるならば、500,000人までがコロナウイルスで死ぬかもしれないと示唆しました
一方で健康と社会福祉省は、それはシナリオが起こることを期待していなかったと述べ、日にリーク大臣へのブリーフィングは、「合理的な最悪の場合は、」ウイルスに屈するへの国の4/5のためだったと述べました。
国家安全保障通信チームによる文書は、「現在の計画の前提は、症候性症例の2〜3パーセントが死亡につながることである」と警告した。
これは、50万人の英国人が死ぬ可能性があることを意味します。
DHSCの広報担当者は次のように述べています。「コロナウイルスが英国に何らかの影響を与えることを当初から明らかにしており、合理的な最悪のシナリオを含め、あらゆる偶発性について計画しているのはそのためです。重要なことは、それが起こることを期待するということではありません。 

「公安は最優先事項であり、イングランドでは現在確認済みの症例はわずか13件ですが、公衆衛生の専門家と科学者のチームが24時間体制で働いており、NHSと英国をより広く準備しています。」

世界保健機関(WHO)の高官は、中国国外の国々がコロナウイルスの「単純に準備ができていない」という懸念を抱いていると語った。
WHOの中国特使であるブルース・アイルワード博士は火曜日に次のように警告しました。「この病気の時はすべてです。このような病気とは日々違いをもたらします。」
世界は「単に準備ができていない」と彼は付け加えた。「非常に迅速に準備することができますが、大きな変化は考え方にある必要があります。」
イタリアでの感染症の数が一晩で45人から32人に増え、11人が死亡したため、ヨーロッパ全体で恐怖が広がっています。
英国では、学校はドアを閉め、海外旅行から戻った後、生徒に自己隔離するよう警告しました。イングランドのトップドクターは、世界的なパンデミックが発生した場合、英国の家族を隔離し、輸送サービスを削減する必要があるかもしれないと警告しました。
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引用:https://www.independent.co.uk/news/health/coronavirus-news-latest-deaths-uk-infection-flu-a9360271.html

2020年2月14日金曜日

最終ページ - 武漢ウイルス学研究所 石正麗(Zhengli-Li Shi)教授と米国ノースキャロライナ大学との共同研究 Nature Medicine誌 2015年 - (方法)

中国科学院、武漢ウイルス学研究所 Zhengli-Li Shi [ 石 正麗 (せき せいれい、シー・ジェンリー)教授 & 米国ノースキャロライナ大学Ralph S. Baric教授の共同研究論文の和訳だよ。
【Google翻訳 & Sobokuによる和訳修正】

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循環するコウモリのコロナウイルスのSARS様クラスターはヒトへ感染する可能性を示す

原著論文タイトル:A SARS-like cluster of circulating bat coronaviruses shows potential for human emergence
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Main(本文)- 最後のページ(方法)





方法

ウイルス、細胞、in vitro感染およびプラークアッセイ

野生型SARS-CoV(Urbani)、マウス適応型SARS-CoV(MA15)、およびキメラSARS様CoVは、ダルベッコの改良イーグルで増殖したVero E6細胞(米国陸軍感染症研究所から入手)で培養されました培地(DMEM)(ギブコ、カリフォルニア州)および5%胎児クローン血清(FCS)(ハイクローン、サウスローガン、ユタ州)および抗生物質/抗真菌薬(ギブコ、カリフォルニア州カールスバッド)ACE2オーソログ(相同分子種)を発現するDBT細胞(Baric実験室、出所不明)は、ヒトとジャコウネコの両方について以前に報告されています。bat Ace2配列はRhinolophus leschenaultiの配列に基づいており、bat Ace2発現するDBT細胞は前述のように確立されました8偽の実験は、HIVベースの偽ウイルスを用いたものと同様であった、前述のように調製し10、そして発現HeLa細胞(ウイルス学の武漢研究所)で調べACE2オルソログ(相同分子種)HeLa細胞は、前述のように10% FCS(ギブコ、カリフォルニア州)を補充した最小必須培地(MEM)(ギブコ、カリフォルニア州)で増殖させた24前述のようにVero E6、DBT、のCalu-3 2B4および初代ヒト気道上皮細胞における増殖曲線を行った825ワーキングストックを作成するために使用された元のシードストックには汚染がありませんが、ワーキングセルラインストックは最近マイコプラズマについて認証またはテストされていません。HAE培養のためのヒト肺は、ノースカロライナ大学チャペルヒル施設内審査委員会承認プロトコルの下で調達されました。HAE培養は、繊毛および非繊毛上皮細胞および杯細胞を含む高度に分化したヒト気道上皮を表します。前述のように、培養物は使用前の数週間、気液界面でも成長します26簡単に言えば、細胞をPBSで洗浄し、ウイルスを感染させるか、PBSで37℃で40分間模擬希釈しました。感染後、細胞を3回洗浄し、時間「0」を示すために新鮮な培地を加えた。記載された各時点で、3つ以上の生物学的複製が収集されました。サンプル収集では盲検化は使用されず、サンプルはランダム化されませんでした。すべてのウイルス培養は、グループ2が以前に説明したように、バイオセーフティキャビネットに冗長ファンを備えたバイオセーフティレベル(BSL)3の実験室で行われましたすべての要員は、タイベックのスーツ(感染症防護服)、エプロン、ブーティを備えた動力式空気清浄レスピレーター(Breathe Easy、3M)を着用し、二重手袋を着用していました。

シーケンスクラスタリングと構造モデリング

代表的なCoVのスパイクのS1ドメインの完全長ゲノム配列およびアミノ酸配列は、GenbankまたはPathosystems Resource Integration Center(PATRIC)からダウンロードされ、ClustalXに合わせて、100のブートストラップを使用するか、またはPhyMLを使用(https://code.google.com/p/phyml/)パッケージ。ツリーは、PhyMLパッケージで最尤法を使用して生成されました。スケールバーはヌクレオチド置換を表します。70%を超えるブートストラップをサポートするノードのみにラベルが付けられます。このツリーは、CoVがα-CoV、β-CoV、およびγ-CoVとして定義された3つの異なる系統発生グループに分割されていることを示しています。古典的なサブグループクラスターは、β-CoVの場合は2a、2b、2c、および2d、α-CoVの場合は1aおよび1bとしてマークされます。モデラー(Max Planck Institute Bioinformatics Toolkit)を使用して構造モデルを生成し、結晶構造2AJF(Protein Data Bank)に基づいて、ACE2と複合したSARS RBDのSHC014およびRs3367のホモロジーモデルを生成しましたホモロジーモデルは、MacPyMol(バージョン1.3)で視覚化および操作されました。

SARS様キメラウイルスの構築

野生型ウイルスとキメラウイルスの両方は、SARS-CoV Urbaniまたは対応するマウス適応(SARS-CoV MA15)感染性クローン(ic)のいずれかから派生しました27SHC014のスパイク配列を含むプラスミドを制限消化により抽出し、MA15感染クローンのEおよびFプラスミドに連結しました。クローンは、ユニークなクラスII制限エンドヌクレアーゼ部位(BglI)が隣接する公開された配列を使用して、6つの連続したcDNAとして設計され、Bio Basicから購入しました。その後、野生型のキメラSARS-CoVおよびSHC014-CoVゲノム断片を含むプラスミドを増幅、切除、連結および精製した。次に、in vitro転写反応を行って全長ゲノムRNAを合成し、前述のようにVero E6細胞にトランスフェクトしました。2トランスフェクトされた細胞からの培地を収穫し、その後の実験のシードストックとして役立てました。キメラウイルスおよび完全長ウイルスは、これらの研究で使用する前に配列分析により確認されました。キメラ変異体と完全長のSHC014-CoVの合成構築は、ノースカロライナ大学施設内バイオセーフティ委員会および懸念の二重使用研究委員会によって承認されました。

倫理声明

この研究は、NIHの実験動物福祉局(OLAW)による動物の世話と使用に関する推奨事項に従って実施されました。ノースカロライナ大学チャペルヒル校(UNC、許可番号A-3410-01)の施設内動物管理使用委員会(IACUC)は、これらの研究で使用される動物試験プロトコル(IACUC#13-033)を承認しました。

マウスおよび生体内感染

雌、10週齢、12ヵ月齢のBALB / cAnNHsDマウスをHarlan Laboratoriesに注文しました。マウスの感染は前述のように行われました20手短に言えば、動物をBSL3実験室に持ち込み、感染前に1週間順化させました。感染および弱毒生ウイルスワクチン接種のために、マウスをケタミンとキシラジンの混合物で麻酔し、チャレンジ(誘発)時に鼻腔内感染させ、50μlのリン酸緩衝生理食塩水(PBS)または希釈したウイルスを各時点で3または4匹のマウスで図の凡例に記載されている用量ごとの感染グループ。個々のマウスの場合、全用量の吸入の失敗、鼻からの接種物の泡立ち、または口からの感染を含む感染の表記法により、研究者の裁量でマウスのデータが除外される可能性があります。感染後、他の事前に確立された除外または包含基準は定義されていません。動物実験では盲検化は使用されず、動物は無作為化されませんでした。予防接種については、若齢および高齢マウスに、ミョウバンまたは模擬PBSを含む0.2μgの二重不活化SARS-CoVワクチンの20μl容量をフットパッド注射でワクチン接種した。次に、22日後に同じレジメでマウスを追加免疫し、その後21日目にチャレンジしました。すべてのグループについて、プロトコルに従って、動物は実験期間中、病気の臨床徴候(ハンチング、毛羽立ち、活動低下)について毎日監視されました。最初の7日間は体重減少を毎日モニターし、その後、動物が最初の開始体重に回復するまで、または3日間連続して体重増加を表示するまで体重モニタリングを続けました。開始時の体重の20%以上を失ったすべてのマウスに地上給餌を行い、20%カットオフ未満である限り、1日に複数回さらにモニターしました。開始時の体重の30%以上を失ったマウスは、プロトコルに従って即座に安楽死しました。瀕死状態にある、または回復する可能性が低いと思われるマウスも、研究者の裁量で人道的に犠牲にされました。安楽死は、イソフルランの過剰摂取を使用して行われ、頸部脱臼により死亡が確認されました。すべてのマウス研究は、ノースカロライナ大学(動物福祉保証#A3410-01)で、UNC機関動物管理使用委員会(IACUC)によって承認されたプロトコルを使用して実施されました。

組織学的分析

左肺を摘出し、1週間膨張させずに10%緩衝ホルマリン(Fisher)に浸しました。組織をパラフィンに包埋し、UNC Lineberger Comprehensive Cancer Center組織病理学コア施設によって5μm切片を調製しました。抗原染色の程度を決定するために、市販のポリクローナルSARS-CoV抗ヌクレオカプシド抗体(Imgenex)を使用してウイルス抗原について切片を染色し、前述のように気道および実質の染色について盲検法でスコアリングしました20画像は、Olympus DP71カメラを備えたOlympus BX41顕微鏡を使用してキャプチャされました。

ウイルス中和アッセイ

前述のように、プラーク減少中和力価アッセイは、SARS-CoVのに対して、以前に特徴付けられた抗体を用いて実施した111213簡単に言えば、中和抗体または血清を2倍に連続希釈し、100 pfuの異なる感染性クローンSARS-CoV株と37℃で1時間インキュベートしました。次に、ウイルスと抗体を、5×105個のVero E6細胞/ウェルを含む6ウェルプレートに、複数の複製(≥ 2)。37°Cで1時間インキュベートした後、細胞に培地中の0.8%アガロース3mLを重ねました。プレートを37℃で2日間インキュベートし、ニュートラルレッドで3時間染色し、プラークをカウントしました。プラーク減少の割合は、(1 –(抗体を含むプラークの数/抗体を含まないプラークの数))×100として計算されました。

統計分析

すべての実験は、2つの実験グループ(2つのウイルス、またはワクチン接種コホートと非ワクチン接種コホート)を対比して実施されました。したがって、ウイルス力価と組織学スコアリングの有意差は、個々の時点での両側スチューデントのt検定によって決定されましたデータは通常、比較される各グループに分散され、同様の分散がありました。

バイオセーフティとバイオセキュリティ

報告された研究は、ノースカロライナ大学施設内バイオセーフティ委員会が実験プロトコルを承認した後に開始されました(プロジェクトタイトル:コウモリSARS様CoVの感染性クローンの生成;ラボ安全計画ID:20145741;スケジュールG ID:12279)。これらの研究は、インフルエンザ、MERS、SARSウイルスを含む特定の機能獲得研究に関する米国政府の審議プロセス研究資金提供一時停止前に開始されました(http://www.phe.gov/s3/dualuse/Documents/gain-of-function .pdf)。このペーパーは、資金提供機関であるNIHによってレビューされました。これらの研究の継続が要求され、これはNIHによって承認されました。
SARS-CoVは厳選されたエージェントです。これらの研究のすべての作業は、SARS-CoV、MERs-CoV、およびその他の関連するCoVの承認された標準操作手順(SOP)および安全条件で実行されました。弊社の施設内CoV BSL3施設は、微生物および生物医学研究所(BMBL)のバイオセーフティ、米国保健福祉省、公衆衛生局、疾病管理センター(CDC)で推奨されている安全要件に適合するように設計されています。 )およびNIH。研究所の安全計画が提出され、施設はUNC環境安全衛生局(EHS)とCDCによる使用が承認されました。施設への入場には、電子カードによるアクセスが必要です。すべての労働者は、電動空気清浄呼吸器(PAPR)を安全に使用するためにEHSによって訓練されています。BSL3施設での適切な作業習慣と積極的な医療監視計画が実施されています。CoV BSL3施設には冗長ファン、ファンへの非常用電源、生物学的安全キャビネットおよび冷凍庫が含まれ、施設はSealSafeマウスラックに対応できます。BSL3剤に分類される材料は、SARS-CoV、コウモリのCoV前駆体株、MERS-CoV、およびこれらの病原体に由来する変異体で構成されています。BSL3施設内では、認定されたクラスIIバイオセーフティキャビネット(BSC)で感染性ウイルスの実験が行われます。スタッフ全員がスクラブ、タイベックのスーツとエプロン、PAPRと靴カバーを着用し、両手は二重手袋です。BSL3ユーザーは、大学の従業員の健康管理クリニック(UEOHC)が監視する医療監視計画の対象となります。BSL3で働いている期間中のCoV感染に関連する症状の年次インフルエンザ予防接種と義務的な報告。すべてのBSL3ユーザーは、曝露管理および報告プロトコルの訓練を受けており、自己検疫の準備ができており、緊急事態の際に地元の感染症管理部門に安全に届けられるよう訓練されています。潜在的な暴露イベントはすべて、EHSとUEOHCによって報告および調査され、CDCとNIHの両方に報告されます。

アクセッションコード

アクセッション

タンパク質データバンク

2AJF



変更履歴



2015年11月20日

最初にオンラインで公開されたこの記事のバージョンでは、著者はZ.-LSへの資金源であるEcoHealth AllianceからのUSAID-EPT-PREDICTの資金提供を承認するために省略しました。 



引用アドレス:A SARS-like cluster of circulating bat coronaviruses shows potential for human emergenceNat Med. 2015 Dec;21(12):1508-13. 

④武漢ウイルス研究所 石正麗(Zhengli-Li Shi)教授と米国ノースキャロライナ大学との共同研究 Nature Medicine誌 2015年

中国科学院、武漢ウイルス研究所 Zhengli-Li Shi [ 石 正麗 (せき せいれい、シー・ジェンリー)教授 & 米国ノースキャロライナ大学Ralph S. Baric教授の共同研究論文の和訳だよ。
【Google翻訳 & Sobokuによる和訳修正】

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循環するコウモリのコロナウイルスのSARS様クラスターはヒトへ感染する可能性を示す

原著論文タイトル:A SARS-like cluster of circulating bat coronaviruses shows potential for human emergence
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Main(本文)続き - ❹

SARS-CoV流行の間、ヤシジャコウネズミとヒトで検出されたCoV株との間にリンクがすぐに確立されました4この発見に基づいて、一般的な出現のパラダイムは、流行性のSARS-CoVがコウモリウイルスに由来し、ジャコウネコに飛びついて、受容体結合ドメイン(RBD)内に変化を組み込み、ジャコウネコAce2への結合を改善したと主張しています(18)。生きた動物市場の人々へのその後の曝露により、ジャコウネコ株によるヒトの感染が可能になり、それが流行株になりました(図4a)。しかし、系統発生分析により、初期のヒトSARS株はジャコウネコ株よりもコウモリ株に密接に関連しているように見えることが示唆されています18したがって、第2のパラダイムでは、直接的なコウモリとヒトの伝播がSARS-CoVの出現を開始し、ヤシジャコウネコが継続的な感染の二次宿主および貯蔵所として機能したと主張しています(図4b19両方のパラダイムについて、二次宿主におけるスパイク適応が必要であると見なされており、ほとんどの変異はRBD内で発生すると予想され、それにより感染の改善が促進されます。どちらの理論も、コウモリのCoVのプールは限られており、宿主域の突然変異はランダムでまれであり、人間の将来の出現イベントの可能性を減らすことを意味しています。

私たちの研究は他の出現ルートを無効にしませんが、循環コウモリのCoVプールが突然変異や適応なしでヒトに感染することができる「安定した」スパイクタンパク質を維持する第3のパラダイムを主張します(図4c)。この仮説は、SARS-CoVの骨格構造にSHC014スパイクを含むキメラウイルスが、ヒト気道培養およびRBD適応のないマウスの両方で強い感染を引き起こす能力によって示されています。以前に特定された病原性CoVバックボーンの観察と相まって3,20、我々の結果は、SARSのような緊急株に必要な出発物質が動物の宿主で現在循環していることを示唆しています。特に、全長SHC014-CoVはおそらくヒトの疾患を媒介するために追加の骨格構造の適応を必要としますが、CoVファミリーで文書化された高頻度の組換えイベントは、将来の出現の可能性とさらなる準備の必要性を強調しています。

これまで、動物集団のゲノミクス選別は、主にアウトブレイク設定における新規ウイルスの特定に使用されてきました21ここでのアプローチは、これらのデータセットを拡張して、ウイルスの出現と治療効果の問題を検証します。SHC014スパイクをもつウイルスは、ヒトの病気に最適なモデルである初代の気道培養で複製する能力があるため、潜在的な脅威であると考えています。さらに、観察されたマウスの病因は、RBC適応なしで、SHC014含有ウイルスが哺乳類モデルで疾患を引き起こす能力を示しています。注目すべきことに、SARS-MA15と比較した場合の肺の示差的指向性と、SARS-CoV Urbaniと比較したHAE培養での全長SHC014-CoVの減衰は、ACE2結合(スパイクの処理能力、受容体のバイオアベイラビリティ、または宿主の免疫反応の拮抗作用を含む)を超える因子が出現に寄与する可能性があることを示唆しています。しかしながら、これらの知見をヒトの病原性の可能性に解釈(翻訳)するには、非ヒト霊長類でのさらなる試験が必要です。重要なことに、利用可能な治療法の欠如は、さらなる研究および治療法の開発の重要な必要性を明確化します。この知識があれば、SHC014などのグループ2b固有のCoVの出現を防ぐ監視プログラム、診断試薬、効果的な治療法を作成できます。これらは、同様の異種プールを維持する他のCoVブランチに適用できます。

将来の新興ウイルスに対する準備を提供することに加えて、このアプローチは、米国政府が定めた機能獲得の一時停止(GOF = gain-of-function)研究22の文脈で考慮する必要があります出現の以前のモデル(図4a、b)に基づいて、SHC014-MA15などのキメラウイルスの作成は、病原性を増加させるとは予想されていませんでした。SHC014-MA15は、その親マウスに適応したSARS-CoVと比較して弱毒化されていますが、MA15骨格構造内の野生型UrbaniスパイクによるCoVの病原性を調べる同様の研究では、マウスの体重減少がなく、ウイルス複製が減少しました23したがって、Urbaniスパイク–MA15 CoVと比較して、SHC014-MA15は 発症の増加を示しています図1)。これらの発見に基づいて、科学的レビューパネルは、哺乳類モデルの病原性の増加を排除できないため、追跡するのが危険すぎる循環株に基づいてキメラウイルスを構築する同様の研究とみなす可能性があります。マウス適応株の制限およびエスケープ変異体を使用したモノクローナル抗体の開発と相まって、CoVの出現と治療効果の研究は、前進が著しく制限される可能性があります。合わせて、これらのデータと制限は、GOF研究の懸念の交差点を表しています。将来のアウトブレイクの準備と軽減の可能性を、より危険な病原体を作成するリスクと比較検討する必要があります。今後の方針を策定する際には、これらの研究によって生成されたデータの価値と、これらのタイプのキメラウイルス研究が、関連する固有のリスクに対してさらなる調査を必要とするかどうかを考慮することが重要です。
全体として、私たちのアプローチでは、メタゲノムデータを使用して、コウモリSARSのようなCoV SHC014によってもたらされる潜在的な脅威を特定しています。キメラSHC014ウイルスは、ヒトの気道培養で複製し生体内で発症し現在の治療法から逃れる能力があるため、SARS様ウイルスの循環に対する監視と改善された治療法の両方が必要です。また、私たちのアプローチは、メタゲノムデータの使用をロック解除して、ウイルスの出現を予測し、この知識を将来の新たに発生するウイルス感染の治療準備に適用します。
(本文終了。方法セクションに続く)
図4:コロナウイルスの出現パラダイム。コロナウイルス株は、コウモリの集団を循環する準種のプールで維持されています。ab)従来のSARS-CoV出現理論は、ホスト範囲変異体(赤い丸)が、代替ホストの感染を可能にするランダムでまれな発生を表すと仮定しています。二次宿主パラダイム(a)は、非ヒト宿主がコウモリ前駆ウイルスに感染しており、適応を通じてヒトへの感染を促進すると主張しています。その後のヒトでの複製は、流行性ウイルス株につながります。直接的なパラダイム(b)中間宿主を必要とせずにコウモリと人間の間で伝播が起こることを示唆している 選択は、二次宿主で複製する密接に関連するウイルスを有するヒト集団で起こり、両方のウイルスの持続性と適応の継続を可能にします。c)キメラSARS様ウイルスのデータは、準種プールが突然変異を必要とせずにヒト細胞に感染できる複数のウイルスを維持していると主張しています(赤い丸)。流行の発生には二次宿主またはヒト宿主の適応が必要となる可能性がありますが、SHC014スパイクを含むウイルスが毒性のCoV骨格構造(緑色の輪郭で囲まれた円)と組み換えられた場合、流行病がヒトの結果である可能性があります。既存のデータは、3つのパラダイムすべての要素をサポートしています。
( 次のページへ続く)
引用アドレス:A SARS-like cluster of circulating bat coronaviruses shows potential for human emergenceNat Med. 2015 Dec;21(12):1508-13.