Natureの姉妹紙 "Cell Research" にアビガンの活性結果が登場（2月4日）！
翻訳しておくよ。
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レムデシビルとクロロキンは、最近出現した新規コロナウイルス（2019-nCoV）をin vitroで効果的に阻害します
Cell Research (2020)
編集者様へ、
2019年12月、中国中部の人口1,100万人の都市である武漢で、未知の病原体に起因する新規肺炎が発生しました。最初のケースは、武漢のシーフード市場での暴露に関連していました。1 2020年1月27 日現在、中国当局は、81人の死亡を含む中国本土で2835人の確定症例を報告した。さらに、香港、マカオ、台湾で19件の確定症例が特定され、タイ、日本、韓国、米国、ベトナム、シンガポール、ネパール、フランス、オーストラリア、カナダで39件の輸入症例が特定されました。病原体はすぐに、重症急性呼吸器症候群CoV（SARS-CoV）と密接に関連する新規コロナウイルス（2019-nCoV）として特定されました。2現在、新しいウイルスに対する特定の治療法はありません。したがって、病気と戦うために効果的な抗ウイルス剤を特定することが緊急に必要です。
創薬への効率的なアプローチは、既存の抗ウイルス薬が関連するウイルス感染の治療に有効かどうかをテストすることです。2019-nCoVはに属しBetacoronavirusもSARS-CoVの中東呼吸器症候群CoVの（MERS-CoVの）が含まれています。リバビリン、インターフェロン、ロピナビル-リトナビル、コルチコステロイドなどのいくつかの薬物がSARSまたはMERSの患者に使用されていますが、一部の薬物の有効性については議論の余地があります。3この研究では、リバビリン、ペンシクロビル、ニタゾキサニド、ナファモスタット、クロロキンを含む5つのFAD承認薬と、2つの有名な広域抗ウイルス薬レムデシビル（GS-5734）および アビガン ファビピラビル（T-705）の抗ウイルス効率を評価しましたin vitroでの2019-nCoVの臨床分離株。
2019-nCoVの細胞毒性、ウイルス収量、感染率に対するこれらの化合物の影響を測定するために、標準的なアッセイが実施されました。まず、Vero E6細胞（ATCC-1586）の候補化合物の細胞毒性をCCK8アッセイで測定しました。次に、Vero E6細胞にnCoV-2019BetaCoV / Wuhan / WIV04 / 2019を感染させました2さまざまな濃度の試験薬の存在下で0.05の感染多重度（MOI）で。DMSOはコントロールで使用されました。有効性は、定量的リアルタイムRT-PCR（qRT-PCR）を介した細胞上清中のウイルスコピー数の定量化によって評価され、感染後48時間（pi）（細胞変性）で免疫蛍光顕微鏡によるウイルス核タンパク質（NP）発現の視覚化で確認されました感染のこの時点では効果は明らかではありませんでした）。7つの試験薬のうち、リバビリンを含む3つのヌクレオシド類似体の高濃度（最大有効濃度の半分（EC 50）= 109.50μM、細胞毒性の半分の濃度（CC 50）> 400μM、選択性指数（SI）> 3.65）、ペンシクロビル（EC 50 = 95.96μM、CC 50 > 400μM、SI> 4.17）および アビガン ファビピラビル（EC 50 = 61.88μM、CC 50 > 400μM、SI> 6.46）は、ウイルス感染を減らすために必要でした（図 1aおよび補足情報、図 S1）。しかし、 アビガン ファビピラビルは、エボラウイルスのチャレンジからマウスを保護するのに100％有効であることが示されていますが、Vero E6細胞のEC 50値は67μM と高く、4この抗ウイルスヌクレオシドを評価するには、さらなるin vivo研究が推奨されます 膜融合を防止するMERS-CoVの強力な阻害剤であるナファモスタットは、2019-nCoV感染に対して阻害性でした（EC 50 = 22.50μM 、CC 50 > 100μM、SI> 4.44）。ニタゾキサニドは、ヒトおよび動物のコロナウイルスを含む広範なウイルスに対する抗ウイルス能を持つ市販の抗原虫剤であり、低マイクロモル濃度で2019-nCoVを阻害しました（EC 50 = 2.12μM ; CC 50 > 35.53μM; SI> 16.76） 。2019-nCoV感染に対するこの薬剤のさらなるin vivo評価が推奨されます特に、2つの化合物remdesivir（EC 50 = 0.77μM ; CC 50 > 100μM; SI> 129.87）およびクロロキン（EC 50 = 1.13μM ; CC 50 > 100μM、SI> 88.50）は、低マイクロモル濃度でウイルス感染を強力にブロックしましたそして、高いSIを示しました（図 1a、b）。
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| 図1：試験薬のin vitro 2019-nCoVに対する抗ウイルス活性。 | a。 Vero E6細胞は、示された抗ウイルス薬の異なる用量の48時間の治療で、MOI 0.05の2019-nCoVに感染しました。次いで、細胞上清中のウイルス収量をqRT-PCRにより定量化した。これらの薬物のVero E6細胞に対する細胞毒性は、CCK-8アッセイによって測定されました。グラフの左および右のY軸は、それぞれウイルス収量の平均阻害率と薬物の細胞毒性を表します。実験は3回繰り返しました。 bレムデシビルおよびクロロキンの治療時のウイルス感染の免疫蛍光顕微鏡検査。ウイルス感染と薬物治療は、上記のように実行されました。感染後48時間で、感染細胞を固定し、一次抗体としてのコウモリSARS関連CoV2のNPに対するウサギ血清と、Alexa 488標識ヤギ抗ウサギIgG（1：500; Abcam）でプローブしました。それぞれ二次抗体。核はヘキスト染料で染色されました。バー、100μm cおよびdレムデシビルとクロロキンの添加時間実験。 「フルタイム」治療では、Vero E6細胞を薬物で1時間前処理し、ウイルスを加えて2時間付着させました。その後、ウイルスと薬物の混合物を除去し、実験終了まで細胞を薬物含有培地で培養しました。 「侵入」処理では、ウイルスが付着する前に薬物を細胞に1時間加え、2時間後、ウイルスと薬物の混合物を新鮮な培地に交換し、実験の最後まで維持しました。 「エントリ後」の実験では、薬は午後2時から追加され、実験の最後まで維持されました。すべての実験グループについて、細胞はMOI 0.05で2019-nCoVに感染し、感染細胞上清中のウイルス収量はqRT-PCR cによって定量化され、感染細胞におけるNP発現は14 h p.iでのウェスタンブロットdによって分析されました |
レムデシビルは最近、培養細胞、マウス、および非ヒト霊長類（NHP）モデルにおける幅広いRNAウイルス（SARS / MERS-CoV 5を含む）感染に対する有望な抗ウイルス薬として認識されています。現在、エボラウイルス感染症の治療薬として臨床開発中です。6レムデシビルはアデノシン類似体であり、発生期のウイルスRNA鎖に組み込まれ、早期に終了します。7添加時間アッセイでは、ウイルス侵入後の段階でレムデシビルが機能していることが示されました（図 1c、d）、ヌクレオチド類似体としての推定抗ウイルス機構と一致している。ウォーレン等。NHPモデルでは、10 mg / kg用量のレムデシビルを静脈内投与すると、血中の活性型（10μM）が同時に持続し、エボラウイルス感染から100％保護されることが示されました。7私たちのデータは、Vero E6細胞の2019-nCoVに対するremdesivirのEC 90値が1.76μMであることを示しており、その作業濃度はNHPで達成される可能性が高いことを示唆しています。予備データ（補足情報、図 S2）は、2019-nCoVに敏感なヒト細胞株（ヒト肝癌Huh-7細胞）のレムデシビルもウイルス感染を効率的に阻害することを示しました。2
広く使用されている抗マラリアおよび自己免疫疾患薬であるクロロキンは、潜在的な広域抗ウイルス薬として最近報告されています。図8に示すように、9クロロキンは、ウイルス/細胞融合に必要なエンドソームpHを上げる、ならびにSARS-CoVのの細胞受容体のグリコシル化を妨害することによって、ブロックウイルス感染によく知られています。10添加時間アッセイにより、クロロキンはVero E6細胞の2019-nCoV感染のエントリー時とエントリー後の両方の段階で機能することが示されました（図 1c、d）。抗ウイルス活性に加えて、クロロキンには免疫調節活性があり、in vivoで抗ウイルス効果を相乗的に高める可能性があります。クロロキンは、経口投与後、肺を含む全身に広く分布しています。Vero E6細胞の2019-nCoVに対するクロロキンのEC 90値は6.90μMであり、500 mgの投与を受けた関節リウマチ患者の血漿で示されるように、臨床的に達成可能です。11クロロキンは安価で安全な薬剤であり、70年以上使用されているため、2019-nCoVに対して臨床的に適用される可能性があります。
我々の発見は、レムデシビルとクロロキンがin vitroでの2019-nCoV感染の制御に非常に効果的であることを明らかにしています。これらの化合物は、安全性の実績を持つヒト患者で使用されており、さまざまな病気に対して有効であることが示されているため、新規コロナウイルス病に罹患しているヒト患者で評価することをお勧めします。
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